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　　临床样本的免疫荧光染色显示，眼部黑色素瘤组织中的整体乳酸化水平明显高于正常黑素细胞组织（p0.05）（图1a，b）。更高的整体乳酸化水平预示着更早的复发和增强的癌症侵袭性（log-rank检验，p0.05）（图 1c，d）。同样地，western blot分析显示，大多数眼部黑色素瘤细胞系的整体乳酸化水平也升高了（图1e，f）。免疫荧光染色显示乳酸化蛋白主要定位于细胞核，而免疫印迹检测的主要条带接近17 kDa。对乳酸化蛋白免疫沉淀后进行银染色质谱（MS），结果显示该条带为组蛋白H3（图1g）。因此，作者决定研究上述现象是否由H3K18la引起。同样，与正常黑色素细胞组织相比，眼部黑色素瘤组织中H3K18la水平与整体乳酸化水平的趋势相同（图1i，j），H3K18la水平升高表明预后较差（log-rank检验，p0.05）（图1k，l）。在大多数眼部黑色素瘤细胞系中也观察到更高的H3K18la水平（图1e，h）。western blot检测证实了眼部黑色素瘤组织中整体乳酸化水平和H3K18la水平的升高（图1m）。这些数据表明，

　　为了评估组蛋白乳酸化抑制是否能减弱眼部黑色素瘤的肿瘤发生，作者降低了肿瘤细胞内的整体组蛋白乳酸化水平。使用糖酵解抑制剂（2-DG）和肟酸，以及乳酸脱氢酶（LDHA和LDHB)的siRNA，以减弱乳酸生成和组蛋白乳酸化（图2a）。在眼部黑色素瘤细胞（OCM1和CRMM1细胞）中，两种糖酵解抑制剂均显著降低了细胞内乳酸（图2b，c）以及整体乳酸化和H3K18la水平（图2d，e）。LDHA缺陷（图2f）或LDHB缺陷（图2f）的眼部黑色素瘤细胞都没有出现整体组蛋白乳酸化的显著减少。然而，同时沉默LDHA和LDHB（图2f）显著损害了组蛋白乳酸化，同时米乐M6(MiLe)亚洲官方网站- 赔率最高在线投注平台，还显著抑制了细胞增殖（图2g-j）和迁移（图2k，l）。此外，向LDHA/LDHB缺陷细胞中添加乳酸钠（Nala）成功地提高了组蛋白乳酸化水平（图2f），并部分恢复了细胞增殖（图2g-j）和迁移（图2k，l）。

　　为了揭示组蛋白乳酸化在基因表达中的调控作用，作者使用抗H3K18la抗体进行了染色质免疫共沉淀，然后进行测序（ChIP-seq）。ChIP-seq数据显示，H3K18la在启动子区域富集（图3a）。KEGG分析显示，这些H3K18la特异性基因在代谢途径和肿瘤相关途径中富集（图3b），表明组蛋白乳酰化在肿瘤发生中具有调控作用。通过将ChIP-seq数据(GEO登录号：GSE156674)与使用糖酵解抑制剂处理&不处理的细胞转录组(GEO登录号：GSE156675)以及正常&肿瘤细胞转录组(GEO登录号：GSE137675)的RNA测序(RNA-seq)数据相结合，我们鉴定出4个抗h3k18la -ChIP靶基因，这些基因在糖酵解抑制剂处理的细胞中mRNA水平显著降低，在肿瘤细胞中高表达（图3c）。其中YTHDF2启动子上的H3K18la信号显著富集（图3d）。ChIP-qPCR检测也表明，H3K18la在YTHDF2启动子区域富集，而糖酵解抑制剂减少了这种富集（图3e，f）。此外，ChIP-qPCR检测显示，经糖酵解抑制剂处理后，EP300-组蛋白乳酸化writer在YTHDF2启动子上的结合水平显著降低（图3g，h）。经糖酵解抑制剂处理后，YTHDF2的蛋白（图3i，j）的表达水平均显著降低。综上所述，YTHDF2的转录受到Y3K18la的正向调控。

　　由于YTHDF2可以被H3K18la直接调控，作者接下来探讨了其在眼部黑色素瘤中的功能。YTHDF2在眼黑色素瘤细胞系中在RNA（图4a，b）和蛋白水平（图4c、d）均高表达。此外，免疫荧光染色显示，与正常黑素细胞组织相比，YTHDF2在眼部黑色素瘤组织中的表达显著上调（p0.05）（图4e，f），且YTHDF2的表达量更高与不良预后呈正相关（log-rank检验，p0.05）（图4g，h）。基因表达谱交互式分析（GEPIA）数据库证实，高YTHDF2水平与较差的预后相关（图4i）。在成功敲除YTHDF2后（图5a，b的细胞中进行CCK-8检测，结果显示与对照组细胞相比YTHDF2敲除细胞数量显著减少（图5c，d)。平板集落形成实验和transwell实验发现，下调YTHDF2基因抑制了肿瘤细胞集落的形成和迁移(图5e-h)。综上所述，这些数据表明YTHDF2在眼部黑色素瘤中作为一种致癌基因。

　　MeRIP-seq和meCLIP-seq数据（GEO登录号：GSE137675）显示，PER1和TP53在3‘UTR区域有m6 A位点（图7d，e）。MeRIP-qPCR检测发现，与IgG组相比，m6A特异性抗体组中PER1和TP53 mRNA得到了富集（图7f，g）。RIP-qPCR分析显示，PER1和TP53 mRNA主要与YTHDF2相互作用（图7h，i）。YTHDF2敲低显著上调了PER1和TP53 蛋白水平（图7j）。此外，作者还观察到PER1和TP53被组蛋白乳酸化诱导剂（Nala）下调（图7k）。接下来，作者设计回复实验，观察沉默PER1和TP53是否会影响YTHDF2的敲低作用（图8a)。沉默PER1和TP53细胞后，部分恢复了YTHDF2敲低导致的细胞增殖（图8b-e）和迁移（图8f，g）受损。综上所述，这些数据表明，异常的YTHDF2-PER1/TP53轴有助于眼部黑色素瘤的肿瘤进展。